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[실험 Q&A] SDS gel marker가 내려오지 않습니다.
오른쪽 마커처럼 내려와야 하는 것이 저의 전기영동에서는 밑에 뭉쳐지고 내려오지 않고 있습니다.. 전기영동 gel 의 %를 변경해야 할까요.. 아니면 전기영동 시간을 더 늘려야 할까요. 그런데 전기영동 시간을 늘려버리면 gel을 뚫고 나와버릴것 같은데 부탁드리겠습니다. |
gel을 어떻게 만들었는지, running buffer 어떤거 사용하는지 알려주세요. |
Gel은 10% 구성으로 그대로 넣었고, DW 6mL 30% acrylamide 5mL 1.5M Tris-HCl(pH 8.8) 3.8mL 10% SDS 0.15mL 10% ammonium persulfate 0.15mL TEMED 0.006mL
running buffer는 직접 만들어 사용하는데, 10X Tris glycine SDS buffer 100mL + 3'DW 900mL 만들어서 사용합니다. |
왼쪽이 제품에서 보여준 그림이고 오른쪽이 직접 내린 마커죠?
gel%에 따라서 작은 사이즈의 단백질은 벌어지지 않아요. 지금 10%에서 25 kda 이하의 단백질은 구분이 되지 않고 똑같은 속도로 내려가는거에요. 더 높은 %의 gel을 만들어서 똑같이 실험해 보면 25 kda 이하도 분리될겁니다. |
왼쪽은 gradient gel이므로 동일gel을 사용하든지, 단일 % gel을 사용하려면 %를 더 올려야 합니다. |
밑 부분은 크기가 많이 작아 잘 분리되지 않습니다 저렇게 작은 크기의 단백질을 보시려면 gel 농도를 많이 올려야 합니다 |
오른쪽 마커처럼 내려와야 하는 것이 저의 전기영동에서는 밑에 뭉쳐지고 내려오지 않고 있습니다. 전기영동 gel 의 %를 변경해야 할까요.. 아니면 전기영동 시간을 더 늘려야 할까요. 그런데 전기영동 시간을 늘려버리면 gel을 뚫고 나와버릴것 같은데 부탁드리겠습니다.
